Coloration de Gram : protocole, résultats, positive, négative

Définition : c'est quoi une coloration de Gram ?

La coloration de Gram est la coloration différentielle la plus utilisée en microbiologie. Elle permet en colorant l'intérieur des bactéries de les différencier sur échantillon selon leur forme (paires, groupes, chaînes…) et leur affinité pour les colorants. "Grace aux colorants utilisés, on affine la caractérisation du type de bactéries à Gram positif ou à Gram négatif et leur morphologie en bacilles ou coques" souligne le Dr Inès Boussen. La coloration de Gram reste une étape essentielle dans l'analyse médicale pour la détermination des pathogènes.

Pourquoi faire une coloration de Gram ?

La coloration de Gram est généralement prescrite quand une infection est suspectée sur différents types de prélèvement : sanguin, urinaire, vaginal, digestif… "Dans le cadre d'un examen cytobactériologique des urines (ECBU) pour pyélonéphrite ou d'un examen du liquide céphalo-rachidien en vue de suspicion d'une infection du système nerveux central, par exemple", illustre le Dr Boussen. Elle peut être effectuée très rapidement en moins de 24 heures et permettre d'orienter le diagnostic. Pour pouvoir choisir le traitement adéquat, des examens complémentaires pourront être réalisés (recherche d'antigènes ou d'anticorps dirigés contre les bactéries, examens sanguins). Souvent un antibiogramme est nécessaire pour déterminer l'antibiotique le plus efficace pour traiter l'infection.

Protocole : quelles sont les étapes d'une coloration de Gram ?

Quel que soit le colorant utilisé, les différentes étapes sont les mêmes.

• À partir d'un prélèvement, un frottis est fait, séché à l'air et fixé à la chaleur. Une première application est réalisée avec du violet de gentiane.
• La lame est ensuite rincée à l'eau pour une 2e application de lugol, le mordant, pendant 1 minute.
• La lame est de nouveau rincée à l'eau pour une 2e application d'alcool (1 minute).
• Une derrière étape de rinçage à l'eau et l'application d'un contre-colorant.
• La lame est ensuite rincée et séchée pour une analyse des résultats de la procédure de coloration au microscope.

"En raison de leur structure de paroi plus épaisse et de composition chimique particulière, les bactéries Gram + gardent la coloration violette. Les bactéries Gram -, avec une paroi plus fine et plus perméable à la décoloration, perdent la couleur violette. De manière à les visualiser, on recolore avec de la fuschine (rose). Les bactéries Gram+ resteront violettes alors que les Gram- seront maintenant teintées en rose", note le Dr Boussen.

Comment interpréter les résultats d'une coloration de Gram ?

Les résultats d'une coloration de Gram sont interprétés au microscope : les différentes bactéries visibles sont alors observées. "On précise si les bactéries sont Gram + (violet) ou Gram - (rose), leur forme : soit rondes (coques) soit en bâtonnets (bacilles), soit en spirales ou hélices (spirochètes) éventuellement leur taille si elles sont petites ou grosses, leurs manières d'être regroupées, par exemple : en amas, en chaînettes ou en paires, si elles sont dans les cellules, leur quantité", ajoute le Dr Boussen. La coloration de Gram colore les cellules, notamment les globules rouges ou les globules blancs. Leur présence ou absence sera également rapportée.

Coloration de Gram positive : quelle signification ?

Si la coloration de Gram se présente positive, les bactéries peuvent être des coques ou des bacilles et selon leur présentation, les micro-organismes observés pourront être des Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Listeria, Lactobacillus, Clostridium… Ils permettront ainsi de mettre en avant certaines infections.

Coloration de Gram négative : quelle signification ?

Si la coloration de Gram se présente négative, les bactéries seront des Haemophilus, Legionella, Fusobacterium, Neisseira… Ainsi observés, ils permettront de mettre en avant la situation clinique.

Merci au Dr Inès Boussen, infectiologue, à la Pitié-Salpêtrière, à Paris